Repeat-dose and local tolerance toxicity of SARS-CoV-2 FINLAY-FR-02 vaccine candidate in Sprague Dawley rats.

This study evaluates safety of FINLAY-FR-02, a vaccine candidate against SARS-CoV-2 based on the recombinant receptor binding domain conjugated to tetanus toxoid, in a preclinical, repeat-dose toxicity and local tolerance study. Sprague Dawley rats were randomly allocated to three experimental groups: control (receiving physiological saline solution); placebo (receiving all vaccine components except antigens) and vaccine group (receiving three doses of the vaccine candidate, 37.5 µg of RBD) administered intramuscularly in hind limbs at 24 h intervals during three days. We evaluated physiological condition, pain, food and water consumption, body temperature, dermal irritability, injection site temperature and inflammation, immunological response, blood chemistry, relative organ weight, histopathology and immunotoxicology. The product was well tolerated; no clinically relevant changes, pain, local effects or adverse systemic toxicological changes or deaths were observed. These preliminary results permitted the Cuban regulatory authorities to authorize clinical trials in humans.

Ensayo de inmunogenicidad y toxicidad aguda del candidato vacunal contra el cólera vax-COLER® / Immunogenicity and acute toxicity assay of the vaccine candidate against cholera vax-COLER®

Para el control y prevención del cólera humano se han llevado a cabo diferentes estrategias, entre las cuales, la vacunación es una de las medidas más eficaces. La evaluación preclínica de candidatos vacunales requiere de la demostración de la seguridad de los mismos, para lo cual los estudios toxicológicos son determinantes, al ser obligatorios y altamente regulados. Este estudio tuvo como objetivo demostrar la relevancia de las ratas Sprague Dawley como biomodelo a través de su respuesta inmunológica al candidato vacunal contra el cólera, vax-COLER®, utilizando la técnica de determinación de anticuerpos vibriocidas. Además, evaluar los efectos toxicológicos locales y sistémicos por la administración de una dosis de vax-COLER® a través de la evaluación de síntomas, del consumo de agua y alimentos, el peso corporal y estudios anatomopatológicos. La vacuna vax-COLER® resultó inmunogénica y no evidenció síntomas ni muertes, no hubo cambios en el peso corporal y los consumos de agua y alimentos se comportaron de forma similar entre todos los grupos. Los estudios anatomopatológicos solo mostraron cambios a nivel histológico en los ganglios linfáticos mesentéricos y placas de Peyer de los animales vacunados, con presencia de hiperplasia de los folículos secundarios subcapsulares, hallazgo que difirió significativamente con el resto de los grupos. Se concluye que la vacuna vax-COLER® es inmunogénica en ratas Sprague Dawley, demostrando la relevancia del biomodelo para la evaluación de la seguridad preclínica y que la aplicación de una dosis no produjo efectos tóxicos agudos generales ni locales(AU)

Different strategies have been carried out for the control and prevention of human cholera. Vaccination is one of the most effective strategies. Preclinical evaluation of vaccines needs to prove their safety; whereby toxicological studies are decisive. They are mandatory and highly regulated. This study was aimed to demonstrate the relevance of Sprague Dawley rats as a biomodel, through the immunological response to vax-COLER® cholera vaccine, using the technique of determination of vibriocidal antibodies. In addition, local and systemic toxicological effects were evaluated after administration of a dose of vax-COLER®; through the evaluation of symptoms, water and food consumption, body weight and anatomopathological studies. The vax-COLER® vaccine was immunogenic and showed no symptoms or deaths. No changes in body weight were detected, and food and water consumption were similar among all groups. The anatomopathological studies showed histological changes in the mesenteric lymph nodes and Peyer's patches of the vaccinated animals, with hyperplasia of the subcapsular secondary follicles, finding that differed significantly from the rest of the groups. It is concluded that vax-COLER® vaccine is immunogenic in Sprague-Dawley rats, demonstrating the relevance of the biomodel for the evaluation of preclinical safety, as well as that the application of a single dose did not produce acute general or local toxic effects(AU)

Reactogenicity of Bordetella pertussis vaccines formulations using aluminum adjuvants in Sprague Dawley rats / Reactogenicidad de formulaciones de vacunas de Bordetella pertussis utilizando adyuvantes de aluminio en ratas Sprague Dawley

Combined vaccines for childhood are a strategy in the prevention of several diseases. These can maximize protection and decrease immunization schedules in children. New candidates are getting closer to being able to meet these needs, but they raise numerous strategic questions related to formulation and regulatory aspects. In addition to being immunogenic and protective must have low reactogenicity when combined with other antigens. Adjuvants are important components in achieving these combinations. Therefore, a reactogenicity study was designed for two Bordetella pertussis formulations containing hydroxide or aluminum phosphate in Sprague Dawley rats. Both formulations dose were administered in 0.2 mL intramuscularly. Clinical evaluations, body weight, water consumption, food, temperature, muscle volume, dermal irritability and pathological studies with special interest at the inoculation site were carried out. Only differences in body temperature and muscle volume were found with a slight increase in values with return to normal. The macroscopic study showed lesions at the site of inoculation, consid­ered characteristics of aluminum adjuvants, such as granulomatous abscesses and the increase in regional lymph nodes near the inoculation site. As conclusion, there are no differences between the formulations of B. pertussis with hydroxide or aluminum phosphate resulted in low reactogenicity.

Las vacunas combinadas resultan una estrategia importante en la obtención de vacunas múltiples para la infancia y el uso de adyuvantes es un componente de gran valor en lograr estas combinaciones, además de ser inmunogénicas y protectoras deben tener baja reactogenicidad, cuando se combinan con diferentes antígenos. Por esta razón, se diseñó un estudio de reactogenicidad a dos formulaciones que contenían hidróxido y fosfato de aluminio con antígenos de Bordetella pertussis en ratas Sprague Dawley. Se administró a cada grupo de ensayo una dosis correspondiente de ambas formulaciones en 0,2 mL por vía intramuscular. Se realizaron observaciones clínicas, comportamiento del peso corporal, consumo de agua, alimentos, temperatura corporal, volumen muscular, irritabilidad dérmica y estudios anatomopatológicos macroscópicos, con especial interés en el sitio de inoculación. No se observaron síntomas, ni muertes en los animales durante el estudio. Tampoco se encontraron diferencias entre los grupos experimentales en cuanto al peso corporal, el consumo de agua y de alimentos; los estudios de temperatura corporal y volumetría muscular evidenciaron un ligero incremento en los valores, los cuales involucionaron rápidamente a la normalidad. En el estudio anatomopatológico macroscópico se observaron lesiones a nivel del punto de inoculación, consideradas propias de los adyuvantes que contienen aluminio, tales como formaciones abscedadas de tipo granulomatosas y el aumento de los ganglios linfáticos regionales cercanos al punto de inoculación. Se concluye que las formulaciones en hidróxido y fosfato de aluminio con antígenos de B.pertussis resultaron ser de baja reactogenicidad.

Consideraciones de los estudios toxicológicos preclínicos para vacunas / Preclinical toxicology considerations for vaccines

Con respecto al artículo publicado en la revista Vaccimonitor, volumen 28 número 1 del año 2019, donde se presentan los resultados del estudio toxicológico realizado a la vacuna antimeningocóccica VA-MENGOC-BC® después de 24 y 36 meses de almacenada de 4 a 8°C, quisiera emitir un grupo de consideraciones sobre algunos de los parámetros evaluados en los estudios toxicológicos para vacunas, con el objetivo de optimizar los resultados. En este sentido, podríamos contribuir a un mejor diseño de los estudios toxicológicos preclínicos, para alcanzar un valor predictivo más cercano a lo esperado en los ensayos clínicos. Por otra parte, estas consideraciones pudieran tenerse en cuenta para el análisis de los aspectos éticos, bienestar animal y determinación del punto final humanitario. Los estudios toxicológicos preclínicos de las vacunas se convirtieron en obligatorios desde la última década del pasado siglo XX, donde se han propuesto y diseñado diferentes estudios para cumplir con estos requisitos. Podemos mencionar, por ejemplo, los estudios de seguridad farmacológica, dosis única, tolerancia local y dosis repetida, entre otros.1 En cada uno de ellos existen parámetros a evaluar que se repiten, como son la observación clínica de los animales, peso corporal, consumo de agua y alimentos, así como la respuesta local y sistémica. Sin embargo, la información que pudiéramos obtener de estos parámetros, desde las pruebas de concepto hasta los propios estudios toxicológicos, no es explotada al máximo. Hoy en día, las guías emitidas por la Organización Mundial de la Salud (OMS), en mi opinión, son una de las más completas, porque recogen gran parte de las regulaciones y guías emitidas por otras entidades como la FDA (del inglés: Food and Drug Administration), EMA (del inglés: European Medicine Agency), OECD (del inglés: Organisation for Economic Co-operation and Development), ICH (del inglés: International Committee of Harmonization), entre otras. Contemplan un amplio número de parámetros a investigar en los estudios toxicológicos, que abarcan desde ensayos in vitro hasta in vivo.1 Sobre estos últimos, cada vez más, y para bien, son tenidos en cuenta los aspectos del bienestar animal y el principio de las 3Rs (Reemplazo, Reducción, Refinamiento).1,2 En este sentido, consideramos que se pueden introducir elementos que pudieran potenciar las respuestas de algunos de los parámetros investigados. En nuestro caso los realizamos para brindar nuevos elementos a la seguridad de un producto con años de aplicación, tanto en niños...(AU)

Estudio de tolerancia local de la vacuna antimeningocóccica VA-MENGOC-BC® en ratas Sprague Dawley. Evaluación a los 24 y 36 meses en estante / Local tolerance study of the VA-MENGOC-BC® antimeningococcal vaccine in Sprague Dawley rats. Evaluation at 24 and 36 months of shelf

La meningitis meningocóccica continua siendo un problema de salud en diferentes países y para la prevención de esta enfermedad se han obtenido diferentes vacunas. La vacuna VA-MENGOC-BC® ha constituido ser eficaz y segura en la prevención de la meningitis meningocóccica contra los serogrupos B y C. Esta ha demostrado buena estabilidad en el tiempo sin cambiar su calidad como producto; fue conservada a estante durante 24 y 36 meses a temperaturas de 4 a 8 °C. Se evaluó su posible potencial toxicológico a través de un estudio de tolerancia local en ratas Sprague Dawley para extender su vida útil. Los animales inmunizados se observaron diariamente para evaluar síntomas locales y sistémicos de toxicidad. Se realizaron evaluaciones del peso corporal, consumo de agua y alimento, termometría, musculometría e irritabilidad dérmica por el método de Draize. Se realizaron estudios anatomopatológicos periódicos para observar posibles efectos adversos. No se observaron síntomas de toxicidad ni muertes. No se encontraron diferencias entre los grupos experimentales en cuanto al peso corporal, el consumo de agua y de alimentos, no se evidenció fiebre, ni irritabilidad local. Anatomopatológicamente a nivel del punto de inoculación se observaron procesos granulomatosos de tipo macrofágicos característicos en las vacunas que contienen hidróxido de aluminio. Estos resultados permitieron concluir que la vacuna VA-MENGOC-BC® que permaneció en estante durante 24 y 36 meses no evidenció efectos adversos locales, ni sistémicos en las ratas(AU)

Meningococcal meningitis continues to be a health problem in different countries and different vaccines have been obtained for the prevention of this disease. VA-MENGOC-BC® vaccine has been effective and safe in the prevention of meningococcal meningitis against serogroups B and C. This has shown good stability over time without changing its quality as a product; it was stored on a shelf for 24 and 36 months at temperatures of 4 to 8 °C. Their possible toxicological potential was evaluated through a local tolerance study in Sprague Dawley rats. Immunized animals were observed daily to evaluate local and systemic toxicity symptoms. Body weight, water and feed intake, thermometry, musculometry were performed and dermal irritability by the Draize method. Anatomopathological studies to observe possible adverse effects were made. No symptoms of toxicity or deaths were observed. No differences were found between the experimental groups in terms of body weight, water and food consumption, no fever or local irritability was evident. Anatomopathologically no lesions of diagnostic value were observed, at the site of inoculation, granulomatous processes of macrophagic type characteristic in vaccines containing aluminum hydroxide were observed. These results allowed us to conclude that the VA-MENGOC-BC® vaccine that remained on the shelf for 24 and 36 months did not show any local or systemic effects in rats(AU)

miRNA-132 orchestrates chromatin remodeling and translational control of the circadian clock.

Mammalian circadian rhythms are synchronized to the external time by daily resetting of the suprachiasmatic nucleus (SCN) in response to light. As the master circadian pacemaker, the SCN coordinates the timing of diverse cellular oscillators in multiple tissues. Aberrant regulation of clock timing is linked to numerous human conditions, including cancer, cardiovascular disease, obesity, various neurological disorders and the hereditary disorder familial advanced sleep phase syndrome. Additionally, mechanisms that underlie clock resetting factor into the sleep and physiological disturbances experienced by night-shift workers and travelers with jet lag. The Ca(2+)/cAMP response element-binding protein-regulated microRNA, miR-132, is induced by light within the SCN and attenuates its capacity to reset, or entrain, the clock. However, the specific targets that are regulated by miR-132 and underlie its effects on clock entrainment remained elusive until now. Here, we show that genes involved in chromatin remodeling (Mecp2, Ep300, Jarid1a) and translational control (Btg2, Paip2a) are direct targets of miR-132 in the mouse SCN. Coordinated regulation of these targets underlies miR-132-dependent modulation of Period gene expression and clock entrainment: the mPer1 and mPer2 promoters are bound to and transcriptionally activated by MeCP2, whereas PAIP2A and BTG2 suppress the translation of the PERIOD proteins by enhancing mRNA decay. We propose that miR-132 is selectively enriched for chromatin- and translation-associated target genes and is an orchestrator of chromatin remodeling and protein translation within the SCN clock, thereby fine-tuning clock entrainment. These findings will further our understanding of mechanisms governing clock entrainment and its involvement in human diseases.

Estudio del patrón de excresión y la capacidad protectora en conejos inmunizados de forma oral con cepas atenuadas de Vibrio cholerae O1 biotipo El Tor

Con el fin de estudiar los patrones de excreción, colonización y la capacidad protectora de cepas vivas atenuadas de Vibrio cholerae O1El Tor, se inmunizaron conejos Nueva Zelandia con estas cepas y su correspondiente parental, con 2 dosis por el modelo de inoculación oral en conejos adultos. Fueron retados 2 semanas después de la segunda dosis por el modelo de intestino ligado, con cepas altamente virulentas de V. choleraeO1 serotipos Ogawa e Inaba y serogrupo O139. Se comprobó que las cepas manupuladas de forma genética no afectan los patrones de excreción, cuando se compara con su parental. Se observó en el reto una disminución en los niveles de colonización de las cepas virulentas de ambos serotipos; tanto en los conejos inmunizados con las cepas atenuadas como con la parental en comparación con animales controles inmunizados con la cepa Escherichia coli K-12, lo que indica que hubo cierto grado de protección. En el caso de los animales retados con la cepa 0139 se demostró que la protección es específica para cada serogrupo pues en este caso no se observó disminución de la colonización.

In order to study the excretion patterns, colonization and protective capacity of live sttenuated strains of Vibrio cholerae O1. E1 Tor, rabbits were immunized in New Zealand with these strains and their corresponding parental strains. 2 doses were administered by the model of oral inoculation in adult rabbits. Rabbits were rotated 2 weeks after the second dose by the model of ligated intestine with highly virulent strains of V. cholerae O1 Ogawa and Inaba serotypes and O139 serogroup. It was proved that the genetically manipulated strains do not effect the excretion patterns when they are compared with their parental strains. It was observed in the challenge a decrease in the levels of colonization of virulent strains of both serotypes, not only among the rabbits immunized with the attenuated strains, but also among those immunizedwith the parental strains in comparison with control animals immunized with the strain of Escherichia coli K-12, which means that there was certain degree of protection. In the case of the animals challenged with the O139 strain it was demonstrated that the protection is specific for each serogroup, since in this case there was no reduction of the colonization.

Estudio del patrón de excresión y la capacidad protectora en conejos inmunizados de forma oral con cepas atenuadas de Vibrio cholerae O1 biotipo El Tor / Study of the excretion pattern and the protective capacity in rabbits orally immunized with attenuated strains of Vibrio cholerae O1 biotype El Tor

Con el fin de estudiar los patrones de excreción, colonización y la capacidad protectora de cepas vivas atenuadas de Vibrio cholerae O1 El Tor, se inmunizaron conejos Nueva Zelandia con estas cepas y su correspondiente parental, con 2 dosis por el modelo de inoculación oral en conejos adultos. Fueron retados 2 semanas después de la segunda dosis por el modelo de intestino ligado, con cepas altamente virulentas de V. cholerae O1 serotipos Ogawa e Inaba y serogrupo O139. Se comprobó que las cepas manupuladas de forma genética no afectan los patrones de excreción, cuando se compara con su parental. Se observó en el reto una disminución en los niveles de colonización de las cepas virulentas de ambos serotipos; tanto en los conejos inmunizados con las cepas atenuadas como con la parental en comparación con animales controles inmunizados con la cepa Escherichia coli K-12, lo que indica que hubo cierto grado de protección. En el caso de los animales retados con la cepa 0139 se demostró que la protección es específica para cada serogrupo pues en este caso no se observó disminución de la colonización (AU)